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2018年6月14日 星期四

等電點(pI值)的計算

概念一:
pKa值愈小的官能基(例如:α-COOH、α-NH3+R group),愈容易被解離。

概念二:
胺基酸的解離型態,會隨著pH值的不同而有所差異。
(因為每個官能基的pKa值不同,所以「有些官能基可能已經解離出H+,但是有些還沒有解離」。)
(因此,胺基酸在不同pH值的環境下,所帶的電荷也會有所不同。)


概念三:
等電點(Isoelectric point(pI值))的定義:「胺基酸或蛋白質的淨電荷為零」時的pH值。
※pI值的計算方法:將「淨電荷為0的胺基酸或蛋白質」兩側的pKa值相加除2。

例題一:求丙胺酸(Gly; G)的pI值。(請查照上面的表格。)
丙胺酸(Gly; G)由左至右所帶的電荷依序為:+1、0、-1。
步驟一:因為淨電荷為0的丙胺酸兩側的pKa值分別為pKα-COOH和pKα-NH3+,所以答案為
步驟二:因此,丙胺酸(Gly; G)的pI值為

例題二:求麩胺酸(Glu; E)的pI值。(請查照上面的表格。)
麩胺酸(Glu; E)由左至右所帶的電荷依序為:+1、0、-1、-2。
步驟一:因為淨電荷為0的麩胺酸兩側的pKa值分別為pKα-COOH和pKR group,所以答案為
步驟二:因此,麩胺酸(Glu; E)的pI值為

概念四:
當很多個胺基酸組合在一起形成蛋白質,表示該蛋白質含有很多個「不同pKa值的」官能基。

例題三:求C-G-E-K(Cys-Gly-Glu-Lys)的pI值。

步驟一:畫出蛋白質的結構式。
步驟二:找出各個官能基以及其pKa值。
畫出結構式後,應該會發現蛋白質兩端分別會有一個α-COOH以及α-NH3+
另外,因為只有CysAspGluR group,所以這個蛋白質總共有「2+35」個官能基。
步驟三:找出蛋白質在「未解離出H+」時所帶的電荷。
因為蛋白質在「未解離出H+」時,不會看到帶負電的官能基(「─COO,S…」等都會以「─COOH,SH…」的形式出現,所以不帶電。),所以只須考慮帶正電的官能基(例如:─NH3+)。
因此,此蛋白質在「未解離出H+」的電荷為「+2」。
步驟四:計算蛋白質的pI值。
因為此蛋白質在「解離出2個H+」之後的淨電荷為0,所以「淨電荷為0的蛋白質」兩側的pKa值為「第二小的pKa值」和「第三小的pKa值」。
因此,此蛋白質的pI值=

參考資料: